 | QIAGEN выпустил новый набор реагентов для количественного анализа транскриптов ALK при немелкоклеточном раке легкого. |
Разработанный компанией QIAGEN набор реагентов «ALK RGQ RT-PCR Kit (24)» позволяет определять уровень экспрессии киназного домена анапластической лимфомы ALK в опухолевых клетках при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ) методом ПЦР в реальном времени. Измененный ген кодирует синтез белка, ведущего к патологической активации рецептора ALK на мембране опухолевой клетки и способствует злокачественному прогрессированию.
Особенности набора ALK RGQ RT-PCR Kit
- Высокая чувствительность
- Возможность работы с парафиновыми блоками;
- Совместимость с амплификатором Rotor-Gene Q (QIAGEN)
- Для анализа одного образца используется одна пробирка
В опубликованном исследовании [1] коллективом авторов был валидирован новый высокочувствительный набор для амплификации киназного домена ALK методом количественной ПЦР в режиме реального времени, позволяющий определить гиперэкспрессию ALK, вызванную перестройками в гене.
В результате ретроспективного анализа образцов, исследованных ранее методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), обнаружили, что все образцы, в которых была найдена перестройка гена ALK методом FISH, показывали наличие транскриптов ALK по результатам ПЦР в режиме реального времени; образцы, не имеющие перестройки, при проведении ПЦР выдавали отрицательный результат. Ниже представлены результаты исследования по чувствительности и точности нового метода.
Чувствительность
Для оценки чувствительности метода, РНК из клеточной линии H2228 титровали в РНК, выделенной из ткани нормального легкого, с 100%, 50%, 15%, 5%, 1% и 0% коэффициентом разбавления, соответственно. ALK транскрипты детектировались при разбавлении 100%, 50% и 15%. (рис. 1). Ct для ALK составил ≤36.9, для ABL1 - Ct≤36.4.
Рисунок 1. Анализ чувствительности метода.
Точность
Все 15 образцов с трансклокацией ALK, включая 12 образцов от пациентов, 2 образца клеточных линий и 1 положительный РНК контроль, показали положительный результат при анализе транскрипта ALK в сравнении и ABL1 в качестве контроля амплификации (рис. 2). Клиническая чувствительность анализа составила 100% (15/15; 95% доверительный интервал: 78%–100%).
21 образец без транслокации ALK, включая 19 образцов от пациентов (рис. 2), 1 контрольный образец РНК из здоровой ткани легкого и 1 отрицательный РНК контроль, показали отсутствие амплификации транскрипта ALK в сравнении с ABL1. Клиническая специфичность составила 100% (21/21; 95% доверительный интервал: 83.8%–100%). Все 36 образцов показали совпадение результатов с методом FISH. Таким образом, точность анализа составила 100% (36/36).
Рисунок 2. Корреляция между количеством транскриптов ALK, анализируемых методом ПЦР в режиме реального времени, и наличием перестроек ALK, выявленных методом FISH.
Таким образом, авторы пришли к выводу, что анализ транскриптов ALK методом ПЦР позволяет быстро определять наличие перестроек гена, может быть совмещен с анализом гена EGFR и не требует забора дополнительного объема опухолевой ткани.
Согласно рекомендациям Российского общества клинической онкологии (RUSSCO), в случае обнаружения НМРЛ обязательной процедурой для выбора тактики терапии является проведение молекулярно-генетического исследования на наличие транслокаций гена ALK. В частности, для терапии НМРЛ, зарегистрирован препарат Кризотиниб, при использовании которого отмечается высокая частота (>60%) полных и частичных регрессов при ALK-позитивном раке легкого.
Источник:
1. Liu, C., Pepper, K., Hendrickson, H., Cagle, P.T., Portier, B.P. (2015). Clinical Validation of a Novel Commercial Reverse Transcription–Quantitative Polymerase Chain Reaction Screening Assay for Detection of ALK Translocations and Amplifications in Non–Small Cell Lung Carcinomas. Arch Pathol Lab Med, doi: 10.5858/arpa.2015-0419-OA (см. на сайте archivesofpathology.org)
Подробную информацию о наборе реагентов ALK RGQ RT-PCR Kit (24) можно получить здесь.
Набор реагентов ALK RGQ RT-PCR Kit (24) не предназначен для медицинских целей на территории РФ.
RSS