Клинико-эпидемиологические критерии для направления на исследование методом ПЦР на пандемический грипп A/H1N1(sw2009):
Контакт с больным ОРЗ при наличии сочетания 3-х из перечисленных групп симптомов:
- Подъем температуры выше 38ºС.
- Сухой кашель.
- Симптомы интоксикации: слабость, потеря аппетита, тошнота, рвота.
- Боли в животе, расстройство стула.
ИЛИ
Если у пациента на момент обращения в ЛПУ имеется:
1. Бронхит, бронхопневмония или пневмония при наличии в анамнезе сочетания 2-х из перечисленных групп симптомов:- Подъем температуры выше 38ºС в течение 2-3 дней.
- Симптомы интоксикации: слабость, потеря аппетита, тошнота, рвота.
- Боли в животе, расстройство стула.
2. Признаки дыхательной недостаточности (одышка, цианоз, у детей – судороги) при наличии в анамнезе сочетания 2-х из перечисленных групп симптомов:
- Подъем температуры выше 38ºС в течение 2-3 дней.
- Симптомы интоксикации: слабость, потеря аппетита, тошнота, рвота.
- Боли в животе, водянистый стул.
Наборы реагентов для исследования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора:
Для выделения РНК:
РИБО-преп кат. № K2-9-Et-100
РИБО-сорб кат. № K2-1-Et-50, K2-1-Et-100
Для обратной транскрипции:
Реверта-L кат. № К3-4-50, К3-4-100
Для ПЦР-амплификации и идентификации кДНК Influenza virus A/H1-swine
АмплиСенс® Influenza virus А/H1-swine-FL кат.№ R-V55(RG)
АмплиСенс® Influenza virus А/H1-swine-FL кат.№ V55-50-R0,5-FEP
АмплиСенс® Influenza virus А/H1-swine-FL кат.№ V55-50-R0,2-FEP
Необходимое базовое оборудование:
Rotor-Gene 3000/6000 для детекции Real-time PCR
ALA-1/4, Джин для детекции по «конечной точке»
Рекомендации по взятию клинического материала
Для проведения анализа используется следующий клинический материал:
- мазки из полости носа и ротоглотки;
- мокрота (либо аспираты из носоглотки и трахеи);
Дополнительно требуются реагенты, не входящие в состав набора реагентов (производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора):
Для мокроты и аспиратов:
Муколизин – реагент для проведения предварительной подготовки мокроты и аспиратов. Кат.№ 180
Для респираторных мазков:
Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков – реагент для хранения мазков из полости носа и ротоглотки. Кат.№ 959 (расфасованная , 0,5 мл в пробирке 2мл с завинчивающейся крышкой, 100 шт), полностью готова к применению (фосфатно-солевой буферный раствор (0,1 моль/л) c добавлением бактериостатического препарата и криоконсерванта
ИЛИ
Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков – реагент для хранения мазков из полости носа и ротоглотки Кат. №957, 958 (нерасфасованная 50 и 100мл соответственно) и пробирки 2 мл с защелкивающейся крышкой Кат.№ MCT-200-C,необходимо предварительное автоклавирование пробирок и расфасовка среды в стерильных условиях
Материалы для взятия клинического материала:
Зонд для мазков из носа и ротоглотки Кат.№ 6100/SG/CS(Зонд-тампон ПС+Виск, 1 шт./уп., ИУ, стерильный). Не использовать зонды на деревянной основе и с хлопковыми тампонами!
Взятие мазков из полости носа
Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами Кат.№ 6100/SG/CS
Если полость носа заполнена слизью перед процедурой рекомендуется провести высмаркивание. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков Кат.№ 959. Конец зонда отламывают или отрезают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
Взятие мазков из ротоглотки
Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами Кат.№ 6100/SG/CS вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.
После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) Кат.№ 6100/SG/CS помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков Кат.№ 959. Конец зонда отламывают или отрезают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
ВНИМАНИЕ! Рекомендуется совмещать мазки из полости носа и ротоглотки в одной пробирке. Для этого рабочие концы зондов после взятия мазков у пациента помещаются в одну пробирку с 500 мкл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков Кат.№ 959 и исследуются как один образец.
Мокрота или аспират из носоглотки или трахеи
Мокроту собирают в стерильные одноразовые контейнеры, после предварительного полоскания полости рта водой. Аспираты из носоглотки и трахеи получают традиционным способом и помещают в стерильные одноразовые контейнеры.
Хранение клинических образцов до проведения анализа
Допускается хранение взятых образцов до проведения исследования в течение 1 сут при температуре от 2 до 8 °С или 1 нед – при температуре не выше минус 16 °С.
Условия транспортирования: при температуре +4+8 °С.
